在單克隆抗體制備的方法中，雜交瘤技術(shù)的使用是非常頻繁的。雜交瘤技術(shù)是在體細(xì)胞融合技術(shù)上發(fā)展起來的一種技術(shù)，它通過將免疫動(dòng)物細(xì)胞的脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞相融合，所得細(xì)胞不僅能夠?qū)崿F(xiàn)體外連續(xù)傳代，更是能持續(xù)性制備抗體。

　　雜交瘤技術(shù)的原理：

　　雜交瘤技術(shù)的基本原理是通過將兩種細(xì)胞融合，讓融合所得的細(xì)胞能夠同時(shí)擁有兩者的特征。而我們常說的雜交瘤抗體制備技術(shù)是通過將經(jīng)過免疫的小鼠脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞，所得細(xì)胞既具備抗體分泌功能，更是能夠?qū)崿F(xiàn)體外連續(xù)培養(yǎng)，具備所謂的永久性。

　　雜交瘤技術(shù)的步驟：

　　1、選擇合適的細(xì)胞并進(jìn)行融合

　　我們知道，脾臟是B細(xì)胞聚集的重要場(chǎng)所，也就是說，只要我們對(duì)機(jī)體進(jìn)行刺激，在脾臟內(nèi)都會(huì)出現(xiàn)明顯的抗體應(yīng)答。所以，我們可以通過在脾臟中提取免疫應(yīng)答后的B細(xì)胞，并將其與骨髓瘤細(xì)胞相融合，而后加入細(xì)胞融合劑促使兩種細(xì)胞相融合;

　　2、選擇合適的培養(yǎng)基

　　細(xì)胞的融合是一個(gè)隨機(jī)的過程，融合后的細(xì)胞可能是脾細(xì)胞與脾細(xì)胞、脾細(xì)胞與B細(xì)胞、B細(xì)胞與B細(xì)胞、未融合的脾細(xì)胞、未融合的B細(xì)胞以及細(xì)胞的多聚體等。結(jié)合細(xì)胞融合所需的營(yíng)養(yǎng)選擇合適的培養(yǎng)基，通過5-7天的培養(yǎng)后，多聚體和未融合的細(xì)胞會(huì)自動(dòng)篩除。而后，我們?cè)賹⑷诤虾蟮碾s交瘤細(xì)胞篩選出來即可;

　　3、細(xì)胞篩選及稀釋

　　細(xì)胞的篩選主要分為兩步來進(jìn)行，第一步是融合細(xì)胞的篩選，將成功融合的細(xì)胞從混合物種篩選出來。第二步是特異性篩選，將能夠產(chǎn)生我們所需抗體的細(xì)胞進(jìn)行特異性篩選;

　　而后，將篩選出來的融合細(xì)胞進(jìn)行充分稀釋，并分配到培養(yǎng)板上，保證每個(gè)空中至少有數(shù)個(gè)細(xì)胞(這一過程也被稱為克隆化)。而后，在將這些陽細(xì)胞進(jìn)行再次克隆化，然后再利用其特異性篩選出合適的細(xì)胞。而后對(duì)所得細(xì)胞進(jìn)行增殖、凍存;

　　雜交瘤細(xì)胞技術(shù)作為單克隆抗體制備的重要手段，所得抗體無論在質(zhì)量還是數(shù)量上都有著極大的優(yōu)勢(shì)。雖然說隨著技術(shù)的不斷發(fā)展，各種全新的技術(shù)也應(yīng)運(yùn)而生，但是雜交瘤細(xì)胞技術(shù)依然是現(xiàn)階段使用非常廣泛的方式之一，而且隨著技術(shù)的不斷完善，相信未來的使用會(huì)變得更加的廣泛。武漢普健生物專業(yè)為廣大用戶提供單克隆抗體制備服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。