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穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建

服務(wù)簡(jiǎn)介

細(xì)胞轉(zhuǎn)染,是將外源分子(如 DNA,RNA 等)導(dǎo)入真核細(xì)胞中的一種技術(shù);

轉(zhuǎn)染分為:瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染

瞬時(shí)轉(zhuǎn)染:指外源 DNA 或 RNA 轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞后不整合到宿主染色體中進(jìn)行外源目的基因的表達(dá)

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染:指外源 DNA 轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞后將外源目的基因整合到宿主染色體中進(jìn)行表達(dá)

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的特點(diǎn):

1. 目的基因整合到染色體上,需要使用線性 DNA(線性 DNA 雖然比超螺旋狀的 DNA 轉(zhuǎn)入量低,但整合率高)

2. 外源 DNA 整合到宿主細(xì)胞染色體中大約為 1%,通常需要通過(guò)一些選擇性標(biāo)記反復(fù)篩選,才能得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細(xì)胞系

3. 隨宿主細(xì)胞基因組復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯,并被穩(wěn)定遺傳

4. 用于獲得穩(wěn)定表達(dá)的外源基因的單細(xì)胞克隆:如大規(guī)模蛋白質(zhì)的合成,長(zhǎng)期的藥理學(xué)研究遺傳機(jī)制的研究等

穩(wěn)定細(xì)胞株:一般是將外源 DNA 克隆到具有某種抗性或者選擇基因的載體上,載體被轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞并整合到染色體中,用載體中所含的選擇標(biāo)志進(jìn)行篩選,篩選得到可穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株

 

穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建流程

服務(wù)優(yōu)勢(shì)

高質(zhì):外源基因嚴(yán)格鑒定,細(xì)胞來(lái)源清晰,無(wú)污染

高產(chǎn):重組蛋白 / 抗體表達(dá)量可快速優(yōu)化至 2g/L 以上穩(wěn)定表達(dá)

穩(wěn)定:獨(dú)有的 GS 穩(wěn)轉(zhuǎn)系列載體配合 MSX 藥物篩選,實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定傳代 15 代以上

快速:篩選高產(chǎn)細(xì)胞株,周期短至 3 個(gè)月

靈活定制:可針對(duì)重組蛋白 / 抗體全長(zhǎng)或片段進(jìn)行個(gè)性化表達(dá)

經(jīng)驗(yàn)豐富:專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì),已成功為國(guó)內(nèi)外多家醫(yī)藥公司和研究單位構(gòu)建交付穩(wěn)定細(xì)胞株

多篩選系統(tǒng):G418/ 潮霉素 / 嘌呤霉素篩選系統(tǒng),GS/DHFR 雙基因篩選系統(tǒng)等

服務(wù)內(nèi)容

服務(wù)項(xiàng)目

客戶提供

服務(wù)內(nèi)容

服務(wù)周期

交付內(nèi)容

穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建

基因序列

載體

細(xì)胞

重組表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建

1周

1-3株細(xì)胞株

技術(shù)服務(wù)報(bào)告

藥物本底濃度測(cè)定

1-2周

細(xì)胞轉(zhuǎn)染

1天

多克隆穩(wěn)定細(xì)胞株篩選及鑒定

2-3月

單克隆穩(wěn)定細(xì)胞株篩選及鑒定

2月

穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株產(chǎn)量、活性檢測(cè)及穩(wěn)定性研究(可選)

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案例展示

構(gòu)建生產(chǎn)重組抗體的CHO穩(wěn)定細(xì)胞株

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